灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用
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[摘要] 目的：探讨灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用。方法：观察灵芝多糖的LD50及对S180小鼠肉瘤细胞的抑制作用。结果：灵芝多糖的LD50远大于国家标准15 g/kg，属无毒级别。同时当灵芝多糖的剂量为250 mg/kg时，对S180小鼠肉瘤细胞的抑瘤率为43.44%。结论：灵芝多糖有很好的抗肿瘤作用，同时无急性毒性，值得推广应用。
[关键词] 灵芝多糖；急性毒性；抗肿瘤作用；中药
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)01(b)-046-02
The acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides
CUI Yongwei
Pharmacy of Lishui County Hospital in Jiangsu Province, Lishui 211200, China
[Abstract] Objective: To investigate the acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides. Methods: Observed the inhibition of the LD50 of ganoderma lucidum polysaccharides to the mouse sarcoma S180 cells. Results: The results showed that the LD50 of the ganoderma lucidum polysaccharides were greater than the national standard of 15 g/kg, it had non-toxic. At the same time, when the dose of Ganoderma lucidum polysaccharides was 250 mg/kg, the inhibition was 43.44% of S180 mouse sarcoma cells. Conclusion: Ganoderma lucidum polysaccharides has a good anti-tumor effect, and no acute toxicity, should be widely applied.
[Key words] Ganoderma lucidum polysaccharides; Acute toxicity; Anti-tumor effect; Traditional Chinese medicine
灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。灵芝主要分布在中国、朝鲜半岛和日本[1-2]。灵芝一般生长在湿度高且光线昏暗的山林中，主要生长在腐树或其树木的根部。灵芝的主要成分为灵芝多糖，它有希望作为肿瘤化学治疗或放射治疗的辅助治疗药，可增强机体免疫功能，提高肿瘤化学治疗或放射治疗的疗效，并因其抗放射作用，改善骨髓造血功能，从而减轻化学治疗或放射治疗的副作用。此外，其“扶正固本”作用尚可全面提高患者的体质，有利于治疗[3-4]。本实验旨在探讨灵芝多糖的急性毒性级别，对S180小鼠肉瘤细胞的体内抑制作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试动物与瘤株 SPF级昆明小鼠(安徽医科大学)；S180小鼠肉瘤细胞(中科院上海细胞生物学研究所)。
1.1.2 主要试剂 灵芝多糖(人工栽培灵芝子实体，广州市白云区大药房)；RPMI-1640培养液(Gibco公司产品)；MTT(Amresco公司产品)；ConA(Sigma公司产品)；光学显微镜(日本Olympus Bx51)；全自动血球分析(日本 Sysmex Kx21)；其他试剂为市售分析纯。
1.2 方法
1.2.1 灵芝多糖提取 人工培养灵芝子实体，粉碎，蒸馏水回流4次，每次40 min，合并回流液过滤，滤液经60℃减压浓缩，离心(6 000 r/min)，去除沉淀，取上清液经95%乙醇沉淀，离心(6 000 r/min)收集沉淀物，再由Sevag法去蛋白，透析，真空干燥得灵芝总多糖[5]。
1.2.2 小鼠急性毒性试验设计 将小鼠分为6 组，每组8只，雌雄各半。将灵芝多糖按剂量分为5组，分别为：L1，30 g/kg；L2，32 g/kg；L3，34 g/kg；L4，36 g/kg；L5，40 g/kg。CN1为对照组，溶剂采用蒸馏水。小鼠灌胃，每只每天1.5 ml，分两次灌服，间隔0.5 h，记录小鼠毒性情况与死亡情况，确定灵芝多糖的LD50。
1.2.3 小鼠抗肿瘤试验设计 取生长最佳状态的S180腹水瘤传代细胞，小鼠右前肢腋下接种。将接种后小鼠随机分为3组，每组6只，雌雄各半。分别为：灵芝多糖组(编号LZ)，样品剂量为250 mg/kg；阴性对照组(溶剂用蒸馏水，编号CN)；阳性对照(CTX)，剂量为100 mg/kg。24 h后开始灌胃，每只0.2 ml/d，连续给药12 d。停药24 h后，小鼠脱颈处死后称重解剖，计算抑瘤率，公式为：抑瘤率(%)=(阴性对照组-试验组)/阴性对照组×100%。
1.2.4 统计方法 采用 SPSS 19.0软件分析，两个样本的q-test比较，用t检验，结果以x±s表示。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 灵芝多糖的急性毒性实验
灵芝多糖的LD50远大于国家标准15 g/kg，属无毒级别。
2.2 小鼠体内抗肿瘤试验
2.2.1 灵芝多糖对小鼠体重的影响 随着灌胃天数增加，小鼠体重不断变化，灵芝多糖组小鼠体重呈逐渐增加趋势，而阳性对照CTX组小鼠体重逐渐下降。具体情况见图1。
2.2.2 灵芝多糖对小鼠采食量的影响 各样品组小鼠采食量随着饲养天数增多，变化较明显，灵芝多糖组采食量稳定增加，而阳性对照CTX组由于副作用太大，阴性对照CN组在肿瘤的作用下，病情加重，食欲下降，采食量减少。具体情况见图2。
2.2.3 灵芝多糖对小鼠脾均重、瘤均重的影响 灵芝多糖实验组的小鼠脾脏指数高于CN和CTX，但方差分析差异无统计学意义。而小鼠的瘤均重测定结果显示，灵芝多糖的抑瘤率为43.44% ......
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