康复新液对光老化HaCaT细胞保护作用的研究(1)
[摘要]目的：观察康复新液对中波紫外线(UVB)照射损伤后皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)的影响，初步探讨其作用机制。方法：采用UVB辐射HaCaT细胞进行造模，分为空白组、模型组、药物组。空白组不给予处理，模型组、药物组分别予不同剂量UVB辐射，药物组在模型组基础上给予康复新液。以CCK8法测定细胞增殖活力，酶生化法测定过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶含量。结果：与模型组比较，同等UVB剂量下药物组乳酸脱氢酶含量下降(P<0.01)，超氧化物歧化酶含量及细胞增殖活力升高(P<0.01)。结论：康复新液可通过减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损伤，从而达到对HaCaT细胞的保护作用。
[关键词]康复新液；中波紫外线；皮肤角质形成细胞；保护作用；光老化；超氧化物歧化酶
[中图分类号]R329.2 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455(2018)11-0145-03
, http://www.100md.com Abstract： Objective To observe the protective effect of Kangfuxin Solution on photoaging Human Keratinocytes (HaCaT cells) induced by ultraviolet radiation B (UVB)， and explore its underlying mechanism. Methods The models of photoaging HaCaT cell were established by UVB radiation， which were divided into blank group， model group and drug group， respectively.The blank group was not treated， the model group and the drug group were given different doses of UVB radiation， while the drug group was given the kangfuxinye on the basis of the model group， and then the cell proliferation activity was measured by CCK8. The contents of catalase， superoxide dismutase and lactate dehydrogenase were measured by enzyme biochemical method. Results Compared with the model group of the same UVB dose， the level of lactate dehydrogenase in the drug group was lower(P<0.01)， while the contents of superoxide dismutase， catalase and cell proliferation increased (P<0.01). Conclusion Kangfuxin Solution has the protective effect on HaCaT cells by inhibiting the damage of UVB to HaCaT cells.
, http://www.100md.com
Key words： kangfuxinye； UVB； HaCaT cells； protective effect； light aging； superoxide dismutase
康復新液主要组分为美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取物，有去腐生肌，改善创面微循环，消除炎症水肿和增强机体免疫等作用[1-2]，其抗氧化作用可提高淋巴细胞及血清溶菌酶的活性，使体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)值上升，调节机体的生理平衡[3-4]。但尚未见抗皮肤角质细胞紫外线损伤的相关报道。
本实验在体外培养永生化人表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)，以不同剂量中波紫外线(ultraviolet light in medium waves， UVB)照射建立细胞模型，观察康复新液对UVB损伤光老化HaCaT细胞的影响，初步探讨其作用机制。
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 主要试剂与仪器：本试验主要试剂有：康复新液(湖南科伦制药有限公司，国药批号Z43020995)；HaCaT细胞(武汉大学中国典型培养物保藏中心)；DMEM培养液(Gibco公司)；胎牛血清(Bovogen公司)；0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)；PBS(Hyclone公司)；CCK8(Cell Counting Kit-8，日本同仁公司)；SOD试剂盒、过氧化物酶(Catalase，CAT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物科技)。主要实验仪器：UVB光疗仪(Sigma公司)、倒置显微镜(日本Olympus)、超净工作台、二氧化碳培养箱和酶标仪等(Bio-Rad公司)。
1.2 HaCaT细胞培养：HaCaT细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养液中，置CO2培养箱(培养条件5% CO2、饱和湿度、37℃)中培养。
1.3 UVB诱导细胞老化：参考相关文献建立细胞光老化模型[5-6]：UVB照射前1d对细胞进行传代，使其汇合度为50%～70%。照射前将培养液吸去，PBS缓冲液冲洗1次，再加入少量PBS缓冲液覆盖照射细胞上层，以UVB光源照射。
1.4 分组及干预处理：实验分为空白、模型组、药物组。空白组：HaCaT细胞不给予康复新液，同时也不进行UVB照射；模型组：HaCaT细胞仅进行UVB照射，照射剂量分别为10mJ/cm2、20mJ/cm2、30mJ/cm2；药物组：细胞经UVB照射处理后再加入康复新液。照射完后，吸弃PBS，加入培养液继续培养24h，获细胞培养上清或细胞，用于后续实验。, http://www.100md.com(王雄 黄艳丽 钱丽洁)
[关键词]康复新液；中波紫外线；皮肤角质形成细胞；保护作用；光老化；超氧化物歧化酶
[中图分类号]R329.2 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455(2018)11-0145-03
, http://www.100md.com Abstract： Objective To observe the protective effect of Kangfuxin Solution on photoaging Human Keratinocytes (HaCaT cells) induced by ultraviolet radiation B (UVB)， and explore its underlying mechanism. Methods The models of photoaging HaCaT cell were established by UVB radiation， which were divided into blank group， model group and drug group， respectively.The blank group was not treated， the model group and the drug group were given different doses of UVB radiation， while the drug group was given the kangfuxinye on the basis of the model group， and then the cell proliferation activity was measured by CCK8. The contents of catalase， superoxide dismutase and lactate dehydrogenase were measured by enzyme biochemical method. Results Compared with the model group of the same UVB dose， the level of lactate dehydrogenase in the drug group was lower(P<0.01)， while the contents of superoxide dismutase， catalase and cell proliferation increased (P<0.01). Conclusion Kangfuxin Solution has the protective effect on HaCaT cells by inhibiting the damage of UVB to HaCaT cells.
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Key words： kangfuxinye； UVB； HaCaT cells； protective effect； light aging； superoxide dismutase
康復新液主要组分为美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取物，有去腐生肌，改善创面微循环，消除炎症水肿和增强机体免疫等作用[1-2]，其抗氧化作用可提高淋巴细胞及血清溶菌酶的活性，使体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)值上升，调节机体的生理平衡[3-4]。但尚未见抗皮肤角质细胞紫外线损伤的相关报道。
本实验在体外培养永生化人表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)，以不同剂量中波紫外线(ultraviolet light in medium waves， UVB)照射建立细胞模型，观察康复新液对UVB损伤光老化HaCaT细胞的影响，初步探讨其作用机制。
1 材料和方法
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1.1 主要试剂与仪器：本试验主要试剂有：康复新液(湖南科伦制药有限公司，国药批号Z43020995)；HaCaT细胞(武汉大学中国典型培养物保藏中心)；DMEM培养液(Gibco公司)；胎牛血清(Bovogen公司)；0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)；PBS(Hyclone公司)；CCK8(Cell Counting Kit-8，日本同仁公司)；SOD试剂盒、过氧化物酶(Catalase，CAT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物科技)。主要实验仪器：UVB光疗仪(Sigma公司)、倒置显微镜(日本Olympus)、超净工作台、二氧化碳培养箱和酶标仪等(Bio-Rad公司)。
1.2 HaCaT细胞培养：HaCaT细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养液中，置CO2培养箱(培养条件5% CO2、饱和湿度、37℃)中培养。
1.3 UVB诱导细胞老化：参考相关文献建立细胞光老化模型[5-6]：UVB照射前1d对细胞进行传代，使其汇合度为50%～70%。照射前将培养液吸去，PBS缓冲液冲洗1次，再加入少量PBS缓冲液覆盖照射细胞上层，以UVB光源照射。
1.4 分组及干预处理：实验分为空白、模型组、药物组。空白组：HaCaT细胞不给予康复新液，同时也不进行UVB照射；模型组：HaCaT细胞仅进行UVB照射，照射剂量分别为10mJ/cm2、20mJ/cm2、30mJ/cm2；药物组：细胞经UVB照射处理后再加入康复新液。照射完后，吸弃PBS，加入培养液继续培养24h，获细胞培养上清或细胞，用于后续实验。, http://www.100md.com(王雄 黄艳丽 钱丽洁)
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