钙粘附素在鼻咽癌中表达的意义
【摘要】 目的 探讨上皮细胞钙粘附素(E-CD)表达与转移的关系。方法 采用免疫组织化学方法对112例鼻咽癌活检病理标本的E-CD表达进行研究。结果 112例鼻咽癌中E-CD阳性表达29例，弱阳性表达33例，阴性表达50例;而20例正常鼻咽粘膜E-CD阳性表达18例，弱阳性表达2例(P<0.01)。中分化鳞状细胞癌阳性表达5/8，低分化鳞状细胞癌阳性表达24/95，未分化细胞癌均为阴性表达(P<0.025)。结论 鼻咽癌细胞E-CD表达改变与鼻咽癌细胞分化程度有关，失去E-CD阳性表达的肿瘤细胞，细胞间的粘附能力减低或丧失，是鼻咽癌易发生颈淋巴结转移的因素之一。
关键词 鼻咽肿瘤 钙粘附素 免疫组织化学方法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)20-2892-02
细胞表达的粘附分子(adhesionmolecules)在恶性肿瘤生长、转移中起着极其重要的作用 [1] ，其中上皮细胞钙粘附素(epithelialcadherin，E-CD)在恶性肿瘤中的异常表达日益受到人们的关注。上皮细胞钙粘附素是一类钙依赖性具同种上皮细胞亲和性的粘附分子，是维持上皮细胞结构完整性和极性的转膜糖蛋白 [1，2] 。有人发现低分化肿瘤与相应正常组织相比E-CD表达消失或异质性减弱，近几年来研究发现，在很多肿瘤中如:乳腺癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤E-CD表达减弱或消失，笔者采用免疫组织化学方法对112例鼻咽癌病理标本进行检测，旨在了解鼻咽癌细胞E-CD表达与鼻咽癌转移的关系。
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1 资料与方法
1.1 资料来源 112例鼻咽癌病理标本取自我院1997年1月～1999年5月经活检病理证实的病例，同时以20例正常鼻咽粘膜活检标本作为对照组。病理分级:中分化鳞状细胞癌8例，低分化鳞状细胞癌95例，未分化癌9例。按1989年UICC TNM分期标准，95例低分化鳞状细胞癌中Ⅱ期20例，Ⅲ期30例，Ⅳ期45例;其中无颈淋巴结转移25例，有颈淋巴结转移76例，远处转移11例。所有病例取标本前均未接受任何治疗。本组除11例有远处转移者行姑息性放疗外，其余病例均予70Gy/35次/7周的根治性放疗(6MV X线)。
1.2 SP法免疫组织化学染色 取10%中性福尔马林固定的石蜡包埋组织标本连续切片两张，层厚5μm，1份作HE 染色以核实诊断，另1份作E-CD组化染色观察。鼠抗人E-CD单克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology公司产品)工作浓度1:20;SP试剂盒(ZYMED公司产品)包括:(1)正常羊血清;(2)生物素标记的羊抗鼠抗体;(3)辣根酶标记的链霉卵白素。所有标本均在同一条件下进行免疫组化染色。以PBS代替鼠抗人抗体为阴性对照，严格按试剂盒推荐方法染色。
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1.3 结果判定标准 细胞膜染成棕黄色为阳性细胞。按Shiozaki方法 [2] 将肿瘤细胞E-CD染色结果分为:(1)阳性表达:细胞膜染成棕黄色或黄色。(2)弱阳性表达:切片内细胞染成黄色且阴性细胞与阳性细胞分散存在。(3)阴性表达:切片内细胞为染色阴性细胞。
1.4 统计学处理 采用SPSS统计软件，进行χ 2 检验，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
112例鼻咽癌中E-CD阳性表达29例(25.9%)，弱阳性表达33例，阴性表达50例;而正常鼻咽粘膜20例中E-CD阳性表达18例(90.0%)，2例弱阳性表达，比较有显著统计学意义(P<0.01)。8例中分化鳞状细胞癌阳性表达5例，95例低分化鳞状细胞癌阳性表达24例，9例未分化细胞癌均为阴性表达(P<0.025)。95例低分化鳞癌Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期E-CD阳性表达分别为10/20、7/30、7/45(P<0.025)。鼻咽低分化鳞状细胞癌E-CD表达与颈淋巴结转移、远处转移及鼻咽残留的关系见表1。
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表1 95例鼻咽低分化鳞癌转移、残留与E-CD表达的关系
3 讨论
上皮细胞粘附素又称Cell CAM120/80，属钙粘附分子(cadherin)的一种，是广泛分布于组织上皮细胞中的跨膜糖蛋白，被认为是上皮细胞选择性粘着剂，担负着所有上皮细胞间的相互粘连功能并维持组织结构的完整性;其异常表达是细胞离散的分子基础 [2～4] 。许多研究表明E-CD的正常表达是肿瘤浸润及转移的抑制因素之一，而E-CD的异常表达与多种肿瘤的分化、浸润、转移与预后有密切的关系，在许多癌转移过程中，都首先破坏细胞膜上的E-CD分子，这种粘附分子的破坏将导致癌转移的发生 [4～6] 。肿瘤组织的E-CD的表达可归纳为4种类型。(1)全部瘤细胞同质性表达一种或多种E-CD(保存型)。(2)瘤体内局灶性减低使E-CD表达呈异质性分布或瘤体内均匀性降低(减低型)。(3)E-CD表达完全减低。(4)瘤细胞虽然能表达某种E-CD，却未能相互粘附。一般认为大多数肿瘤属于前两型，瘤细胞分化良好者E-CD水平较高，低分化和未分化者E-CD水平较低或完全缺如。第4种类型可见于印戒细胞癌等瘤体中，可能与E-CD功能紊乱有关。鼻咽癌组织病理切片免疫组化研究表明，鼻咽癌细胞E-CD表达降低(多为阴性或弱阳性表达)，阳性表达率仅占25.9%，与正常鼻咽粘膜组织阳性表达率90%比较，差异有非常显著性(P<0.01)。随着鼻咽癌肿瘤细胞分化程度的下降而肿瘤细胞阳性表达率相应降低，显示有统计学差异(P<0.025)。若去除细胞分化因素，将鼻咽低分化鳞状细胞癌按1989年UICC TNM标准进行分期比较，结果显示Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病例E-CD阳性表达率依次递减，分别为50%、23.3%和15.5%，差异有显著统计学意义(P<0.025)。
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研究显示鼻咽低分化癌肿瘤细胞E-CD表达低下者易发生颈淋巴结转移(P<0.025)，但远处转移与否在肿瘤细胞E-CD表达上无统计学差异(P>0.05)。同为低分化鼻咽癌而肿瘤细胞呈E-CD表达阳性者治疗后肿瘤残留率高于E-CD表达阴性者，有统计学差异(P<0.05)。研究结果表明，鼻咽癌组织细胞E-CD表达改变与癌细胞的分化程度有关 [7，8] ，失去E-CD阳性表达的肿瘤细胞，其细胞间的粘附能力减低或丧失，极易发生转移和浸润，与文献报道结果一致 [9，10] 。本研究提示鼻咽癌患者E-CD阴 性表达率高可能是其易发生颈淋巴结转移的因素之一。我们认为癌组织E-CD检测可判断鼻咽癌的转移倾向，治疗前通过活检病理组织E-CD表达检测，将有助于临床医师对肿瘤的生物学行为特征作出准确判断与预测，提示需进行必要的辅助检查和治疗。
参考文献
1 Takeichi M.Cadherin cell adhesion recdptors as amorphogenetic reguˉlatar.Science，1991，254:845.
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2 Pignatelli P Vessey CJ.Adhesion molecules-novel molecular tools in tumor pathology.Human Pathol，1994，25(9):849.
3 Buxton RS，Magee AI.Aemin Cell Biol，1992，3(1):157-167.
4 Katayama.Et.BrJ Cancer，1994，69(3):580-585.
5 5Andrews NA，Jones AS，Hdlliwell TR，et al.Expression of the E-cadˉherinβ-catenin cell adhesion complex in primary spuanous cell carciˉnomas of the headand neck and their node metastases.Br J Cancdr，1997，75:1474.
, 百拇医药
6 Shun CT，et al.Hepatogastroenterology，1998，45(22):944-949.
7 Birchmeier W，WDIDNER km，Hulsken J，et al.Molecular medhanisms lesding tocdll junction deficiency in invasive carcinoma.Semin Eancdr Biol，1993，4:231.
8 Valiadch A，Karayiannakis AJ，Ei-Hariry I，et al.Expression of E-cadherin-associated molecules in colorectalpolyps.Am J Pathol，1997，150:1977.
9 Gamallo C，Palacice J，Suarez A，et al.Correlation of E-Cadherin exˉpression with differentiation grade and histological type in breast carcenoma.Am J Pathol，1993，142:987.
10 Jades1，Wittliff PDH.Steroid-Horrnone recepioes in breast cancer.Cancer，1994，53:630.
作者单位:132011吉林省吉林市中心医院病理科
(编辑曲 全), 百拇医药(韩)
关键词 鼻咽肿瘤 钙粘附素 免疫组织化学方法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)20-2892-02
细胞表达的粘附分子(adhesionmolecules)在恶性肿瘤生长、转移中起着极其重要的作用 [1] ，其中上皮细胞钙粘附素(epithelialcadherin，E-CD)在恶性肿瘤中的异常表达日益受到人们的关注。上皮细胞钙粘附素是一类钙依赖性具同种上皮细胞亲和性的粘附分子，是维持上皮细胞结构完整性和极性的转膜糖蛋白 [1，2] 。有人发现低分化肿瘤与相应正常组织相比E-CD表达消失或异质性减弱，近几年来研究发现，在很多肿瘤中如:乳腺癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤E-CD表达减弱或消失，笔者采用免疫组织化学方法对112例鼻咽癌病理标本进行检测，旨在了解鼻咽癌细胞E-CD表达与鼻咽癌转移的关系。
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1 资料与方法
1.1 资料来源 112例鼻咽癌病理标本取自我院1997年1月～1999年5月经活检病理证实的病例，同时以20例正常鼻咽粘膜活检标本作为对照组。病理分级:中分化鳞状细胞癌8例，低分化鳞状细胞癌95例，未分化癌9例。按1989年UICC TNM分期标准，95例低分化鳞状细胞癌中Ⅱ期20例，Ⅲ期30例，Ⅳ期45例;其中无颈淋巴结转移25例，有颈淋巴结转移76例，远处转移11例。所有病例取标本前均未接受任何治疗。本组除11例有远处转移者行姑息性放疗外，其余病例均予70Gy/35次/7周的根治性放疗(6MV X线)。
1.2 SP法免疫组织化学染色 取10%中性福尔马林固定的石蜡包埋组织标本连续切片两张，层厚5μm，1份作HE 染色以核实诊断，另1份作E-CD组化染色观察。鼠抗人E-CD单克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology公司产品)工作浓度1:20;SP试剂盒(ZYMED公司产品)包括:(1)正常羊血清;(2)生物素标记的羊抗鼠抗体;(3)辣根酶标记的链霉卵白素。所有标本均在同一条件下进行免疫组化染色。以PBS代替鼠抗人抗体为阴性对照，严格按试剂盒推荐方法染色。
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1.3 结果判定标准 细胞膜染成棕黄色为阳性细胞。按Shiozaki方法 [2] 将肿瘤细胞E-CD染色结果分为:(1)阳性表达:细胞膜染成棕黄色或黄色。(2)弱阳性表达:切片内细胞染成黄色且阴性细胞与阳性细胞分散存在。(3)阴性表达:切片内细胞为染色阴性细胞。
1.4 统计学处理 采用SPSS统计软件，进行χ 2 检验，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
112例鼻咽癌中E-CD阳性表达29例(25.9%)，弱阳性表达33例，阴性表达50例;而正常鼻咽粘膜20例中E-CD阳性表达18例(90.0%)，2例弱阳性表达，比较有显著统计学意义(P<0.01)。8例中分化鳞状细胞癌阳性表达5例，95例低分化鳞状细胞癌阳性表达24例，9例未分化细胞癌均为阴性表达(P<0.025)。95例低分化鳞癌Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期E-CD阳性表达分别为10/20、7/30、7/45(P<0.025)。鼻咽低分化鳞状细胞癌E-CD表达与颈淋巴结转移、远处转移及鼻咽残留的关系见表1。
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表1 95例鼻咽低分化鳞癌转移、残留与E-CD表达的关系
3 讨论
上皮细胞粘附素又称Cell CAM120/80，属钙粘附分子(cadherin)的一种，是广泛分布于组织上皮细胞中的跨膜糖蛋白，被认为是上皮细胞选择性粘着剂，担负着所有上皮细胞间的相互粘连功能并维持组织结构的完整性;其异常表达是细胞离散的分子基础 [2～4] 。许多研究表明E-CD的正常表达是肿瘤浸润及转移的抑制因素之一，而E-CD的异常表达与多种肿瘤的分化、浸润、转移与预后有密切的关系，在许多癌转移过程中，都首先破坏细胞膜上的E-CD分子，这种粘附分子的破坏将导致癌转移的发生 [4～6] 。肿瘤组织的E-CD的表达可归纳为4种类型。(1)全部瘤细胞同质性表达一种或多种E-CD(保存型)。(2)瘤体内局灶性减低使E-CD表达呈异质性分布或瘤体内均匀性降低(减低型)。(3)E-CD表达完全减低。(4)瘤细胞虽然能表达某种E-CD，却未能相互粘附。一般认为大多数肿瘤属于前两型，瘤细胞分化良好者E-CD水平较高，低分化和未分化者E-CD水平较低或完全缺如。第4种类型可见于印戒细胞癌等瘤体中，可能与E-CD功能紊乱有关。鼻咽癌组织病理切片免疫组化研究表明，鼻咽癌细胞E-CD表达降低(多为阴性或弱阳性表达)，阳性表达率仅占25.9%，与正常鼻咽粘膜组织阳性表达率90%比较，差异有非常显著性(P<0.01)。随着鼻咽癌肿瘤细胞分化程度的下降而肿瘤细胞阳性表达率相应降低，显示有统计学差异(P<0.025)。若去除细胞分化因素，将鼻咽低分化鳞状细胞癌按1989年UICC TNM标准进行分期比较，结果显示Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病例E-CD阳性表达率依次递减，分别为50%、23.3%和15.5%，差异有显著统计学意义(P<0.025)。
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研究显示鼻咽低分化癌肿瘤细胞E-CD表达低下者易发生颈淋巴结转移(P<0.025)，但远处转移与否在肿瘤细胞E-CD表达上无统计学差异(P>0.05)。同为低分化鼻咽癌而肿瘤细胞呈E-CD表达阳性者治疗后肿瘤残留率高于E-CD表达阴性者，有统计学差异(P<0.05)。研究结果表明，鼻咽癌组织细胞E-CD表达改变与癌细胞的分化程度有关 [7，8] ，失去E-CD阳性表达的肿瘤细胞，其细胞间的粘附能力减低或丧失，极易发生转移和浸润，与文献报道结果一致 [9，10] 。本研究提示鼻咽癌患者E-CD阴 性表达率高可能是其易发生颈淋巴结转移的因素之一。我们认为癌组织E-CD检测可判断鼻咽癌的转移倾向，治疗前通过活检病理组织E-CD表达检测，将有助于临床医师对肿瘤的生物学行为特征作出准确判断与预测，提示需进行必要的辅助检查和治疗。
参考文献
1 Takeichi M.Cadherin cell adhesion recdptors as amorphogenetic reguˉlatar.Science，1991，254:845.
, http://www.100md.com
2 Pignatelli P Vessey CJ.Adhesion molecules-novel molecular tools in tumor pathology.Human Pathol，1994，25(9):849.
3 Buxton RS，Magee AI.Aemin Cell Biol，1992，3(1):157-167.
4 Katayama.Et.BrJ Cancer，1994，69(3):580-585.
5 5Andrews NA，Jones AS，Hdlliwell TR，et al.Expression of the E-cadˉherinβ-catenin cell adhesion complex in primary spuanous cell carciˉnomas of the headand neck and their node metastases.Br J Cancdr，1997，75:1474.
, 百拇医药
6 Shun CT，et al.Hepatogastroenterology，1998，45(22):944-949.
7 Birchmeier W，WDIDNER km，Hulsken J，et al.Molecular medhanisms lesding tocdll junction deficiency in invasive carcinoma.Semin Eancdr Biol，1993，4:231.
8 Valiadch A，Karayiannakis AJ，Ei-Hariry I，et al.Expression of E-cadherin-associated molecules in colorectalpolyps.Am J Pathol，1997，150:1977.
9 Gamallo C，Palacice J，Suarez A，et al.Correlation of E-Cadherin exˉpression with differentiation grade and histological type in breast carcenoma.Am J Pathol，1993，142:987.
10 Jades1，Wittliff PDH.Steroid-Horrnone recepioes in breast cancer.Cancer，1994，53:630.
作者单位:132011吉林省吉林市中心医院病理科
(编辑曲 全), 百拇医药(韩)